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PolyGen非脂质体转染试剂采用独特配方的阳离子聚合物为主要成分，其高度的分支结构确保了高正离子电荷密度，使得与带有负电荷的外源基因结合更有效，容易被细胞吸收，排斥少，因此能显著提高外源基因的转染效率，适合多种类型的细胞系，细胞存活率高，可以广泛用于瞬时转染和稳定转染。

PolyGen非脂质体转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有较高的转染效率，较好的重复性，且操作简以及单细胞毒性较小，可用于贴壁细胞和悬浮细胞，与Lipofectamine 2000 Reagent相似。该转染试剂转染细胞时，基本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响，即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。

外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。目前常用的转染试剂是阳离子脂质体和阳离子聚合物，它们容易透过细胞膜，其中阳离子脂质体在体外基因转染中有很高的效率，在体内它迅速被血清清除，会肺组织内累积诱发强烈的抗炎反应，这将导致高水平的毒性，由于阳离子脂质体的局限性，阳离子聚合物转染试剂日益受到重视。

• 胰蛋白酶消化液
  
• 完全培养液和不完全培养液
  
• PBS

• 注意无菌操作，尽量避免污染。
  
• 使用高纯度DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，同时DNA不应含有蛋白和酚。
  
• 影响转染效率的因素有很多，如细胞类型、细胞状态及密度、DNA/siRNA转染量、转染试剂与DNA/siRNA比例等，应该在具体实践中优化来确定最佳转染条件。
  
• 为了取得较高的转染效率，推荐使用在50代以内的细胞进行转染，转染前细胞必须处于良好的生长状态。
  
• 为了取得较高的转染效率，推荐使用高纯度的质粒，OD260/OD280≥1.8。
  
• PolyGen非脂质体转染试剂不应Vortex或离心，宜缓慢晃动混匀。
  
• 在体外细胞转染试验中，可通过预实验在PolyGen非脂质体转染试：DNA(μg)=2:1~6:1之间选择最佳的比例。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• DNA转染：
  
  • (以12孔板为例)在转染前18～24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至12孔板中，并将细胞培养板置于37℃，5% CO₂培养箱培养，待细胞密度达到70～90%即可进行转染。后续操作步骤均按12孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
    
  • 在加入待转染的DNA之前2～4h，加入1mL不含抗生素的完全培养液，置于37℃，5% CO₂培养箱培养。也可使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素使某些细胞转染后出现一定的细胞毒性。
    
  • 配制转染工作液：取两个无菌离心管，分别加入50μL不含抗生素和血清的培养液，取其中一离心管加入1.6～3μg DNA，轻轻混匀；取另一离心管加入3μL PolyGen非脂质体转染试剂，轻轻混匀。室温静置5min，将含有DNA的培养液用微量移液器轻轻加入含PolyGen非脂质体转染试剂的培养液中，轻轻吹打混匀，室温静置20min。
    
  • 将上述转染工作液逐滴滴入对应细胞培养液中，轻轻混匀后置于37℃，5% CO₂培养箱中进行培养。
    
  • 培养4~6h后，更换为含有血清的完全培养液。对于Hela细胞，推荐在转染4h更换培养液；对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6h更换培养液。
    
  • 继续培养24~48h后，观察或收集细胞或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。
    不同细胞器皿转染时培养液、DNA、PolyGen非脂质体转染试剂用量表
    

    	96-well	24-well	12-well	6-well	6cm dish	10cm dish
    铺板培养液	0.15mL	0.5mL	1mL	2mL	5mL	10mL
    无血清培养液	15μL	25μL	50μL	100μL	200μL	500μL
    DNA	0.2μg	0.8μg	1.6μg	4μg	8μg	24μg
    无血清培养液	15μL	25μL	50μL	100μL	200μL	500μL
    PolyGen非脂质体转染试剂	0.4μL	1.6μL	3.2μL	8μL	16μL	48μL

    
    注意：对于12孔板中一个孔的细胞，PolyGen非脂质体转染试剂的用量可以在3～6μL范围内进行适当调节，DNA用量建议在1.6μg，但也可在1～4μg范围内进行适当调节。通常DNA用量(μg)和PolyGen非脂质体转染试剂(μl)用量比例为1:2～6，如有必要可在1:1～10的范围内优化转染效果。为了获得最佳的转染效果，不同的细胞类型和培养条件有所不同，可在上述推荐范围内自行优化转染条件。
• siRNA转染：
  
  • (以12孔板为例)在转染前18～24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至12孔板中，并将细胞培养板置于37℃，5% CO₂培养箱培养，待细胞密度达到50～80%即可进行转染。后续操作步骤均按12孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。
    
  • 在加入待转染的siRNA之前2～4h，加入1mL不含抗生素的完全培养液，置于37℃，5% CO₂培养箱培养。也可使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素使某些细胞转染后出现一定的细胞毒性。
    
  • 配制转染工作液：取两个无菌离心管，分别加入50μL不含抗生素和血清的培养液，取其中一离心管加入40pmol siRNA，轻轻混匀；取另一离心管加入2μL PolyGen非脂质体转染试剂，轻轻混匀。室温静置5min，将含有siRNA的培养液用微量移液器轻轻加入含PolyGen非脂质体转染试剂的培养液中，轻轻吹打混匀，室温静置20min。
    
  • 将上述转染工作液逐滴滴入对应细胞培养液中，轻轻混匀后置于37℃，5% CO₂培养箱中进行培养。
    
  • 培养4~6h后，更换为含有血清的完全培养液。对于Hela细胞，推荐在转染4h更换培养液；对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6h更换培养液。
    
  • 继续培养24~48h后，观察或收集细胞。
    不同细胞器皿转染时培养液、siRNA、PolyGen非脂质体转染试剂用量表
    

    	96-well	24-well	12-well	6-well	6cm dish	10cm dish
    铺板培养液	0.15mL	0.5mL	1mL	2mL	5mL	10mL
    无血清培养液	15μL	25μL	50μL	100μL	200μL	500μL
    siRNA	5pmol	20pmol	40pmol	100pmol	200pmol	600pmol
    无血清培养液	15μL	25μL	50μL	100μL	200μL	500μL
    PolyGen非脂质体转染试剂	0.25μL	1μL	2μL	5μL	10μL	30μL

    
    注意：对于12孔板中一个孔的细胞，PolyGen非脂质体转染试剂的用量可以在1～4μL范围内进行适当调节，siRNA用量建议在20~80pmol范围内进行适当调节。通常siRNA用量(pmol)和PolyGen非脂质体转染试剂(μl)用量比例20:1，如有必要可以在10~40:1范围内优化转染效果。为了获得最佳的转染效果，不同的细胞类型和培养条件有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。siRNA的推荐浓度为20μM，常用浓度范围为10～50μM。对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的PolyGen非脂质体转染试剂和siRNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育20min后，按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。